إنتاج خطوط خلايا الحمل الكلوية الجنينية الخالدة لتطبيقات التكنولوجيا الحيوية البيطرية
المؤلفون): نبيلة السريدي
المؤتمر: مؤتمر دبي وان للصحة
تاريخ النشر: 23 يونيو 2023
الكلمات المفتاحية: خلايا الكلى الظهارية. مستضد SV40 T ؛ تعداء. خلود الخلية
خلاصة
تُستخدم خلايا الكلى الأولية بشكل تقليدي لنشر اللقاحات المضعفة الحية: فيروسات جدري الأغنام أو فيروسات كابري الجدري ، ولكنها تتطلب استعدادات متكررة للخلايا الأولية المعزولة عن الكلى الحيوانية الجنينية. الخلايا الظهارية الأولية للأغنام قصيرة العمر في أنظمة زراعة الخلايا. تقتصر زراعة الخلايا الظهارية الأولية المشتقة من الكلى على عدد قليل جدًا (5-6) من الممرات بحيث تتطلب تجديدًا متكررًا لاستخدامها والذي يرتبط بمخاطر متعددة (التباين الوراثي للمتبرعين ، والعدوى بمسببات الأمراض ، والهشاشة أثناء الثقافة ، إلخ). للتغلب على هذه القيود ، فإن خلود هذه الخلايا في خطوط الخلايا الدائمة ، يشكل نهجًا طويل الأمد. نحن هنا نصف عملية خلود خلايا الحمل الكلوية الجنينية الأولية باستخدام بلازميد يعبر عن التسلسل الذي يشفر مستضد T كبير SV40. تم توصيف وإظهار العديد من الخصائص الهامة في الثقافات الناتجة عن الخلايا الخالدة. يسمح نجاح مراحل تعداء الخلايا الأولية واستنساخ الخلايا بمتابعة توصيف خطوط الخلايا المستنسخة من خلال دراسة مورفولوجيا الخلية ، وقدرتها على التكاثر في الثقافة ، وخصائصها الوراثية الخلوية ، وكذلك الخصائص الكيميائية الحيوية والجزيئية. بعد حوالي عشرين ممرًا ، احتفظت الخلايا الخالدة بالجوانب المورفولوجية المشابهة للخلايا الظهارية الأولية للوالدين وأصبحت خصائص النمو مختلفة تمامًا. أظهرت Polyclonals TISFKC بالإضافة إلى استنساخ TISFKC قدرة أكبر على الانتشار في الثقافة مقارنة بالخلايا الأولية الأبوية. حتى لو ، في المراحل المبكرة من الخلود ، أظهرت الخلايا تعدد الصبغيات غير المتجانسة ، أصبح النمط النووي تدريجيًا مستقرًا ، مطابقًا لذلك الموجود في الخلايا الأولية SFKC (2n = 54). كان اكتشاف الكيمياء الخلوية المناعية لتعبير SV40 T ناجحًا على كل من TISEKC متعدد النسيلة وتلك الخاصة بـ 20 خطًا من الخلايا المستنسخة. من المثير للاهتمام أن خلايا TISFKC-5 المستنسخة تم العثور عليها لتكون سلبية بالنسبة لتعبير مستضد SV40 T ، على الرغم من أنها تحافظ على جميع الخصائص الأخرى المشابهة لـ Polyclonal و 20 مستنسخة أخرى. أظهر تحليل PCR بوضوح وجود جين SV40 T Antigen في الحمض النووي الكلي من TISEKC-5 وكذلك TISEKC الخام. تم حفظ النمط الظاهري الظهاري جيدًا في جميع الخلايا المستنسخة Anfd Polyclonal كما تم الكشف عنها بواسطة الكشف المناعي لتعبير بروتين السيتوكيراتين والفيمنتين. حقيقة أن خط الخلايا TISFKC-5 لم يعد يعبر عن الجين الورمي SV40 T ، ونمطه النووي الطبيعي وحقيقة أن خلايا TISEKC الخالدة يمكن نقلها بشكل فعال بالبلازميدات التي تعبر عن أي بروتينات ذات أهمية ، مما يجعل هذا الخط الخلوي أداة قيمة للدراسات الأساسية و لتطوير التكنولوجيا الحيوية للمنتجات البيطرية. في موازاة ذلك ، مرت TISEKCs بعد ذلك بعدة ممرات في الثقافة وعدة دورات من التجميد والتخزين في النيتروجين السائل ، ثم الذوبان وإعادة الزراعة دون أي تغيير في قدرتها على البقاء أو النمو. وبالتالي ، فإن خطوط الخلايا الخالدة تقدم العديد من المزايا مثل التوفر السريع للخلايا في أي وقت ، والقدرة على التوسع الواسع ، وقوة تقسيم الخلايا غير المحدودة ، وفترة حياة طويلة جدًا. فهي فعالة من حيث التكلفة وسهلة الاستخدام وتوفر إمدادات غير محدودة من المواد وتتحايل على المخاوف الأخلاقية المرتبطة باستخدام الأنسجة الحيوانية والبشرية. يقدم خط الخلايا هذا إمكانية إنتاج لقاح بيطري في ظروف مماثلة تستخدم للقاحات البشرية كما هو مطلوب في مفهوم الصحة الواحدة.